工業(yè)葡萄糖檢測方法

發(fā)酵過程常見工業(yè)葡萄糖檢測方法，如菲林滴定法、氧化酶一偶聯(lián)比色法(GOD POD法) 、氣相色譜法 、高效液相色譜法，旋光法、生物傳感器法。

菲林滴定法 

原理：還原糖可以將菲林試劑中的二價(jià)銅離子還原為一價(jià)銅離子，反應(yīng)終點(diǎn)可以 由次甲基蘭指示（藍(lán)色消失形成磚紅色），根據(jù)一定量的菲林試劑完全還原所需的還原糖量，可計(jì)算加入樣品中的還原糖的含量。

1.試劑 菲林試劑甲液：稱取69.3g硫酸銅晶體，用蒸餾水溶解，定容至1000ml 菲林試劑乙液：稱取346g酒石酸鉀鈉，100g氫氧化鈉，用蒸餾水溶解定容至1000ml 次甲基藍(lán)溶液：1g次甲基藍(lán)溶于100ml水 

2.儀器 水浴鍋。

特點(diǎn)：手工操作，過程復(fù)雜，受到多種因素干擾，但是成本較低，所以目前仍為多數(shù)企業(yè)采用。

通過原理可以分析出本方法檢測結(jié)果其實(shí)是還原糖，而非絕對的葡萄糖量。

氧化酶一偶聯(lián)比色法

GOD-POD法即葡萄糖氧化酶法，可以用來測定葡萄糖。葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)利用氧和水將葡萄糖氧化為葡萄糖酸，并釋放過氧化氫。過氧化物酶(peroxidase，POD)在色原性氧受體存在時(shí)將過氧化氫分解為水和氧，并使色原性氧受體

 

4-氨基安替比林和酚去氫縮合為紅色醌類化合物，即Trinder反應(yīng)。紅色醌類化合物的生成量與葡萄糖含量成正比。這一方法目前在臨床上用于診斷糖尿病。由于可自動(dòng)化操作，因此未來也可能應(yīng)用于發(fā)酵液的檢測。

HPLC法

莫海濤等建立了同時(shí)測定葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和乳糖的高效液相色譜方法。樣品經(jīng)水超聲波浸取，采用Hypersil NH2柱分離，流動(dòng)相為乙晴／水(二者體積比為80：20)，用激光蒸發(fā)光散射檢測器檢測。結(jié)果表明：四者的線性范圍分別為15～1 000，20

 

--1500，15～1000，12～1 000mg／L，檢出限為4．5～6．0 mg／L，樣品的加標(biāo)平均回收率為92.9％～99.0％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.9％～3.5％。與前者相比，HPLC檢測的準(zhǔn)確度和專一性更高。

旋光度法

在葡萄糖濃度與旋光度值的線性關(guān)系的考察中，精密稱取適量經(jīng)98～100℃干燥至恒重的純葡萄糖，加水溶解并稀釋，按照旋光光度法測定，旋光度a對濃度C回歸，得到的回歸方程。結(jié)果表明：當(dāng)葡萄糖質(zhì)量濃度為15.58～103.84 g／L時(shí)，具有良好的線性

 

關(guān)系。

生物傳感器法

葡萄糖生物傳感器的工作原理如下：葡萄糖首先在GOD催化作用下生成過氧化氫，過氧化氫在過氧化物酶(HRP)的催化作用下，將2價(jià)還原態(tài)電介質(zhì)Os氧化成Os3+，氧化態(tài)電介質(zhì)Os3+在較低工作電壓下被還原，產(chǎn)生的還原電流與被測葡萄糖濃度呈線性關(guān)

 

系，通過檢測還原電流即可得到對應(yīng)葡萄糖濃度。

氣相色譜法

采用氣相色譜分析萄萄糖等多羥基化合物時(shí)，由于多羥基化合物極性大、沸點(diǎn)高，直接進(jìn)樣分析無法進(jìn)行，所以多采用硅醚化試劑與羥基反應(yīng)，生成易揮發(fā)、低極性、高穩(wěn)定性的三甲基硅醚衍生物，再進(jìn)行氣相色譜分析。